尊龙凯时 - 人生就是搏!

近期，尊龙凯时生物AAV 技术平台首席科学家Dr. Damien Marsic等人发表最新研究成果，通过定向进化技术获得新的视网膜上皮细胞靶向的rAAV载体。文章“Identification of Novel Retinal Pericyte-Targeting rAAV Vectors Through Directed Evolution”发表于Translational vision science & technology杂志。

https://doi.org/10.1167/tvst.11.8.28

该文章利用基于野生型AAV2构建的高复杂度衣壳文库，通过动物实验对该文库进行多轮筛选，最终获得两个转导效率数倍优于野生型AAV2的变体。

如图所示突变文库基于衣壳蛋白三维结构，在与转导效率，靶向性以及蛋白酶降解等起关键作用的位点进行突变（A, B)，通过两步法文库构建方法构建文库，获得高复杂度的文库。动物实验选用Cspg4-DsRed 报告小鼠进行筛选，每轮筛选利用酶消化视网膜，通过流式进行DsRed阳性细胞分选，提取基因组DNA后再进行PCR来扩增衣壳序列。如此共进行3轮筛选，获得数个候选变体（C）。

将候选变体小量生产病毒，将包装效率低于野生型AAV2的变体排除后，通过动物玻璃体注射实验，使用多线共聚焦扫描激光检眼镜对动物进行眼底成像，DsRed与GFP双通道成像比对，最终获得候选变体,其中变体E和G对视网膜上皮细胞感染能力AAV2具有明显提高。

尊龙凯时生物AAVantage新型AAV血清型筛选和进化平台

尊龙凯时生物以结构和生物信息为基础，在设计高复杂度AAV衣壳文库方面积累了独特的经验。与传统的文库设计方法不同，我们专有新颖的两步式文库构建系统，通过精确地改变衣壳表面位置生成最终文库。由此产生的AAV衣壳文库具有大量（超过一亿）功能变体，并具有显著改变的病毒趋向性和免疫逃逸可能性。

我们可提供定制化的全流程新型AAV血清型进化和筛选服务或授权给客户我们的最佳衣壳变体。目前，我们正在开发针对人体胰腺，肌肉，视网膜，脊椎，肝脏，心脏，肾脏和肺新型AAV衣壳变体。

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